磁力架是實(shí)驗(yàn)室核酸提取、蛋白純化、免疫沉淀等磁珠法分離實(shí)驗(yàn)的核心工具,其正確操作直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性與穩(wěn)定性。但在日常使用中,不少操作人員會(huì)因忽視細(xì)節(jié)陷入誤區(qū),導(dǎo)致磁珠回收率低、目標(biāo)產(chǎn)物純度差等問(wèn)題。本文梳理了磁力架使用的常見誤區(qū),并給出針對(duì)性規(guī)避方案,助力提升實(shí)驗(yàn)可靠性。
一、 誤區(qū)一:盲目選擇磁力架規(guī)格,忽視磁珠適配性
很多實(shí)驗(yàn)室會(huì)根據(jù) “通用性” 采購(gòu)磁力架,卻忽略不同磁珠的磁性強(qiáng)度、粒徑差異對(duì)分離效果的影響。
具體問(wèn)題:使用低磁力磁力架處理高磁含量磁珠,會(huì)出現(xiàn)磁珠吸附不完全、上清液渾濁的情況;反之,強(qiáng)磁力磁力架用于弱磁性磁珠,可能因磁力過(guò)大導(dǎo)致磁珠團(tuán)聚,難以重懸洗脫。
規(guī)避方案
根據(jù)磁珠說(shuō)明書標(biāo)注的推薦磁力強(qiáng)度選擇對(duì)應(yīng)磁力架,優(yōu)先選擇可調(diào)節(jié)磁力的型號(hào)。
結(jié)合實(shí)驗(yàn)容器規(guī)格(離心管、深孔板等)選擇適配的磁力架卡槽,確保容器與磁體緊密貼合,避免磁力分布不均。
二、 誤區(qū)二:液體未完全吸附就棄去,浪費(fèi)目標(biāo)產(chǎn)物
這是實(shí)驗(yàn)中最易出現(xiàn)的誤區(qū),操作人員常急于倒掉上清液,導(dǎo)致部分磁珠仍懸浮在液體中被丟棄。
具體問(wèn)題:磁珠吸附時(shí)間不足,或磁力架擺放角度不當(dāng),磁珠未完全聚集在容器側(cè)壁,傾倒上清時(shí)會(huì)隨液體流失,降低目標(biāo)產(chǎn)物回收率。
規(guī)避方案
參照磁珠說(shuō)明書確定吸附時(shí)間,一般為 30 秒 —2 分鐘,復(fù)雜樣本(如組織裂解液)可適當(dāng)延長(zhǎng)。
將容器垂直放置在磁力架卡槽內(nèi),待磁珠完全吸附至側(cè)壁、上清液澄清后,再緩慢傾倒或用移液器吸取上清。
三、 誤區(qū)三:洗脫時(shí)未脫離磁力架,影響產(chǎn)物釋放
部分操作人員為節(jié)省時(shí)間,直接在磁力架上加入洗脫液并吹打混勻,導(dǎo)致磁珠無(wú)法充分分散。
具體問(wèn)題:磁力架的持續(xù)吸附會(huì)讓磁珠聚集在一起,洗脫液難以充分接觸磁珠表面的目標(biāo)產(chǎn)物,造成洗脫效率低下,產(chǎn)物濃度不達(dá)標(biāo)。
規(guī)避方案
洗脫前務(wù)必將容器從磁力架上取下,再加入洗脫液。
用移液器反復(fù)吹打磁珠,或渦旋振蕩 10—20 秒,確保磁珠完全重懸后,可短暫靜置讓大顆粒雜質(zhì)沉降,再吸取上清液獲得目標(biāo)產(chǎn)物。
四、 誤區(qū)四:忽視磁力架清潔維護(hù),引入交叉污染
磁力架長(zhǎng)期暴露在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中,若清潔不及時(shí),殘留的樣本、磁珠會(huì)成為污染源,影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
具體問(wèn)題:未清潔的磁力架卡槽內(nèi)殘留的核酸、蛋白會(huì)混入新的實(shí)驗(yàn)樣本中,導(dǎo)致 PCR 擴(kuò)增出現(xiàn)非特異性條帶、蛋白檢測(cè)背景值過(guò)高等問(wèn)題。
規(guī)避方案
每次實(shí)驗(yàn)后,用75% 乙醇擦拭磁力架表面及卡槽,待乙醇揮發(fā)后再進(jìn)行下一次實(shí)驗(yàn);若污染嚴(yán)重,可用去離子水沖洗后晾干。
不同類型的實(shí)驗(yàn)(如核酸提取與蛋白純化)建議使用專用磁力架,避免交叉污染。
五、 誤區(qū)五:磁力架長(zhǎng)期閑置,不注重磁體保養(yǎng)
磁力架的磁體性能會(huì)隨時(shí)間和存放環(huán)境下降,若長(zhǎng)期閑置不保養(yǎng),會(huì)導(dǎo)致磁力減弱,影響分離效果。
具體問(wèn)題:磁力架長(zhǎng)期放置在潮濕、高溫環(huán)境,或與其他強(qiáng)磁體近距離接觸,會(huì)造成磁體退磁,吸附磁珠的能力下降。
規(guī)避方案
閑置時(shí)將磁力架存放在干燥、陰涼、遠(yuǎn)離強(qiáng)磁場(chǎng)的位置,避免陽(yáng)光直射和高溫烘烤。
定期檢查磁力強(qiáng)度,若發(fā)現(xiàn)磁珠吸附速度變慢、吸附不完全,及時(shí)更換磁體或整機(jī)。
總結(jié)
磁力架的使用看似簡(jiǎn)單,但從規(guī)格選型到日常維護(hù)的每一個(gè)細(xì)節(jié),都與實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性息息相關(guān)。避開上述五大誤區(qū),遵循標(biāo)準(zhǔn)化操作流程,不僅能提升目標(biāo)產(chǎn)物的回收率與純度,還能延長(zhǎng)磁力架的使用壽命,降低實(shí)驗(yàn)成本。